出版年:

1999

研究生:

邱敏熙

研究生(英文姓名):

論文名稱:

RhoA 對 Ha-ras 過度表達之NIH3T3 細胞之影響

指導教授:

劉校生博士

學位類別:

碩士

校院名稱:

國立成功大學　

系所名稱:

微生物暨免疫學研究所

學號:

s46861092

學年度:

88

語文別:

中文

論文頁數:

74

關鍵詞:

細胞凋亡 ; 細胞骨架 ; 細胞轉移 ; 細胞轉型 ; 細胞皺摺

英文關鍵詞:

Apoptosis ; cytosekeleton ; metastasis ;
transformation ; membrance ruffling

被引用次數:

0

[ 摘要 ]

中 文 摘 要
RhoA 是 Ras 家族成員之一，已知之生理作用為調控 actin fiber 之組合和 focal adhesion 之形成。過量之正常態 RhoA 可使細胞於 10% 血清培養液中形態改變，而在 0.2% 血清之培養液中則會引發細 胞凋亡(aptoptosis)。已知人類腫瘤中約 10-30% 其內源性 Ras 基因發 生突變，過去之研究也發現許多人類疾病都和 Rho 之活化有關，此 外活化 Ras 之可使細胞增生及轉型，其中也包括形態之改變，因此 Ras 與 RhoA 在細胞轉型與凋亡之過程中之相互關係及其共同之影響 值得深入探討。我們的研究發現顯性抑制型 RhoA 會阻斷 Ras 所造成 之細胞轉型作用，突變型 RhoA 則可抑制細胞週期抑制蛋白 p21WAF-1 之表現而使細胞週期繼續進行並促進細胞之增生。此外細胞之移動 其動力來源之一是經由 actin filament 之組合和分解來調控，而 RhoA 之功能之一就是調節 actin filament 之重組。我們將顯性抑制型或突變 型 RhoA 質體轉殖入表現 Ha-ras 之 7-4 細胞中並觀察細胞之生理反應 。結果顯示當 Ras 或 RhoA 過度表現時，細胞之形態皆呈長紡錘狀且 有細胞膜皺摺(membrane ruffling)之現象。此外突變型 RhoA 過度表達 時會活化 NFB 之活性進而抑制 Ras 所引起之細胞凋亡，突變型 RhoA 也會抑制 WAF-1 之活性，並造成過 量之 focal adhesion 並抑制 細胞的移動。相對的，顯性抑制型 RhoA 會抑制 NFB 活性因而無法 阻止 Ras 誘發之細胞凋亡，但卻會加強 WAF-1 之活性，且會抑制細 胞 focal adhesion 現象並加強細胞移動性。總而言之，我們發現 RhoA 之訊息傳導對 Ras 之轉型作用是不可或缺的，此外活化之 RhoA 具有 促進 Ras 轉型作用及細胞增生之能力。腫瘤細胞之轉移是目前癌症治 療上一大難題，細胞移動主要是由於細胞骨架 actin 不平衡的重組所 致，我們發現微量之 RhoA 活性是細胞移動所必須的，但過量 RhoA 活性所引起之 focal adhesion 卻會抑制細胞移動。所以對於突變 Ras 誘發之腫瘤細胞轉移現象，突變 RhoA 基因之調控應是一個可運用 之策略。

[ 英文摘要 ]

Abstract
RhoA, a member of Ras superfamily, plays a major role in controlling the assembly of actin stress fiber and focal adhesion. Wild type RhoA overexpression could cause morphologic changes in the medium with 10% serum but induced apoptosis in the medium with 0.2% serum. Activated Ras could also cause morphologic changes besides inducing cell transformation and proliferation. However, the roles of Ras and Rho in combination as well as their relationship in cell transformation and apoptosis remain unclear. Our transient transfection study demonstrated that dominant-negative RhoA blocked Ras related cell transformation, and mutant RhoA suppressed p21WAF-1/Cip-1 (an inhibitor of cyclin-dependent kinase). Coordinate assembly and disassembly of actin filaments drive mammalian cell migration. In our 7-4 derivatives stablely expressing dominant-negative and mutant RhoA, the cells showed slender morphology and membrane ruffling while Ras or mutant RhoA was overexpressed. Mutant RhoA blocked Ras induced apoptosis through activating NFB and decreasing WAF-1 activity. Moreover, mutant RhoA inhibited cell migration through increase of focal adhesion. Accordingly, dominant-negative RhoA suppressed NFB, increased WAF-1 activity therefore suppressed apoptosis. Dominant-negative RhoA also suppressed the focal adhesion and induced cell migration. In conclusion, we demonstrate that Rho is necessary for Ras transformation. Moreover, RhoA can alter cell morphology, enhances Ras transformation, suppresses cell apoptosis and controls cell migration. Nevertheless, more studies are needed in the field of the signaling pathways between Ras and RhoA. Taken together, our study on RhoA should aid in the development of novel anticancer strategies