|
由於DNA重組技術的進步，使得利用基因來治療癌症成為一個快速發展的
領域。反轉錄病毒基於具有只感染處於分裂狀態細胞的特性，因此，很適
合做為癌症基因治療時，傳送基因的工具。藉由送入細胞激素基因來增強
免疫反應以對抗腫瘤是一有效的策略。此外，利用反義核酸序列(
antisense)來抑制基因表現，不但可偵測疾病之來源，更是目前的一個新
興療法。因此，本篇論文即以小鼠MBT-2細胞所引起的膀胱癌為模式，運
用反轉錄病毒載體攜帶干擾素丙(interferon-g; IFN-g)基因及轉型生長
因子-b1(transforming growth factor-b1; TGF-b1)的反義核酸序列進行
基因治療，並探討此策略之可行性。 IFN-g具有免疫調節的功能。在實驗
動物的腫瘤模式中亦顯示其具有提高抗腫瘤免疫反應的作用。因此，我們
將IFN-g基因構築至反轉錄病毒載體pRUFNeo中，並轉染至包裝細胞株yCRE
內。經G418初步篩選出轉染成功的細胞株後，再以RT-PCR的方式進一步確
認neo及 IFN-g基因的表現。收集此等細胞株之培養液可測得IFN-g的蛋白
質產物。混合此細胞培養液與MBT-2細胞，一起注射至C3H/HeN小鼠皮下，
結果發現腫瘤發生率較低、腫塊較小、且小鼠存活率較高；而活體外測得
的抗腫瘤免疫反應亦較高。在模擬臨床術後免疫治療的動物模式中，IFN-
g之免疫基因治療亦可降低腫瘤之復發率。此外，據報告指出，在膀胱癌
的病例中，TGF-b1的表現有偏高的趨勢。因此，我們應用反義核酸序列的
方式，去阻斷TGF-b1的基因表現。利用反轉錄病毒載體pRUFCD構築一個帶
有TGF-b1反義核酸序列的載體，再將此載體轉染到MBT-2細胞中，以5-
fluorouracil及 cytosine進行篩選，而得到感染成功的細胞株。測試此
等細胞株的細胞培養液可發現TGF-b1的表現減少。此外，此等細胞株在軟
洋菜膠上的細胞群落形成較小。在動物實驗方面，注射了這些細胞株的小
鼠其腫瘤發生率較低，腫塊較小，且有較高的存活率。綜合上述結果，利
用IFN-g基因及TGF-b1反義核酸序列行膀胱癌的基因治療應該是可行的方
法。
|
